国产xxnxx精品视频,欧美精品亚洲精品小说区,波多野成人无码精品电影,在线看欧美国产

服務(wù)熱線

15021010459
新聞中心
當(dāng)前位置:主頁 > 新聞中心 > 造血干細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)步驟及注意事項(xiàng)

造血干細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)步驟及注意事項(xiàng)

更新時間:2014-03-28 點(diǎn)擊次數(shù):1967
造血干細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)步驟
1、胚胎成纖維細(xì)胞的復(fù)蘇:胚胎干細(xì)胞一般是在37℃、5%CO2和95%濕度的培養(yǎng)條件下,生長在鋪有一層滋養(yǎng)細(xì)胞層的細(xì)胞培養(yǎng)皿或者是細(xì)胞培養(yǎng)瓶中(此處以細(xì)胞培養(yǎng)皿為例)。因此要先鋪?zhàn)甜B(yǎng)層細(xì)胞。在37℃水浴鍋里快速融化一管液氮凍存的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞。把融化的細(xì)胞懸浮液加到裝有幾毫升預(yù)熱好的MEF培養(yǎng)基的無菌離心管中,輕輕混勻后,1000×g ,5min離心收集細(xì)胞。吸掉上清(除去凍存液中的DMSO),用10ml預(yù)熱的MEF培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后,加到一個10cm的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,放入37℃,含有5%CO2的加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。根據(jù)情況對細(xì)胞進(jìn)行換液,大約4天左右,細(xì)胞就可以基本長滿整個培養(yǎng)皿,這時可以進(jìn)行傳代、凍存或用于制備滋養(yǎng)細(xì)胞層。
2、滋養(yǎng)細(xì)胞層的制備:把長好的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)基吸掉,加入10ml新鮮的MEF培養(yǎng)基,并在避光的條件下加入110μl配好的絲裂霉素C,混勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)2h。把含有絲裂霉素C的培養(yǎng)基用無菌的15ml離心管收集起來避光保存,在一周之內(nèi)可再次使用(直接使用該培養(yǎng)基處理細(xì)胞5h)。用PBS(不含二價離子)洗滌細(xì)胞2到3次后,用1ml含有EDTA的胰酶消化細(xì)胞,37℃培養(yǎng)箱放置約3min,直到細(xì)胞懸浮起來。用1ml MEF培養(yǎng)基中和胰酶的作用,之后把細(xì)胞收集到離心管里,1000×g離心5min。去掉上清,用1ml MEF培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,之后把細(xì)胞平均分到兩個經(jīng)過0.1%明膠處理過的細(xì)胞培養(yǎng)皿
中,用MEF培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。(明膠處理:加5ml 0.1%的明膠到細(xì)胞培養(yǎng)皿中,在37℃培養(yǎng)箱中至少放置10min,之后把明膠吸掉即可)。一般處理好的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞在1~2h之后即可以貼壁,形成滋養(yǎng)細(xì)胞層,這時的滋養(yǎng)細(xì)胞層即可
用來培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞。制備好的滋養(yǎng)細(xì)胞層可以在MEF培養(yǎng)基中保持1周左右的時間,或者是把細(xì)胞凍存。
3、小鼠胚胎干細(xì)胞(mouse embryonic stem cells,ES cells)的復(fù)蘇
4、小鼠胚胎干細(xì)胞的傳代
5、小鼠胚胎干細(xì)胞的凍存
造血干細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)注意事項(xiàng):
1、絲裂霉素C在操作時要避光,避免其分解。
2、ES細(xì)胞傾向于聚集生長,因此在復(fù)蘇時,要選擇好培養(yǎng)皿的規(guī)格
3、ES細(xì)胞不能長的太滿,應(yīng)避免使各個克隆之間接觸,以免發(fā)上分化。
4、為避免水或血清帶來的污染,對血清應(yīng)進(jìn)行支原體檢測,配好的培養(yǎng)基要進(jìn)行污染測試。

2025 版權(quán)所有 © 重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司  備案號:渝ICP備14000349號-4 sitemap.xml 管理登陸 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)

地址:重慶市江北區(qū)金渝大道153號8棟20-14 傳真:023-63419626 郵件:sales@ys-bio.com

重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司主要經(jīng)營干細(xì)胞研究 干細(xì)胞治療產(chǎn)品 生物試劑 實(shí)驗(yàn)耗材 藥物研發(fā)等產(chǎn)品。

關(guān)注我們

服務(wù)熱線

400-021-2200

掃一掃,關(guān)注我們

性久久久久久久久久不卡| 筱田优在线一区中文字幕| 国产精品香蕉一区二区三区| 国产国产乱老熟女视频网站97| 国产精品高清免费在线色| 污污污污污污网站| 操小穴视频羞羞在线观看| 国产91熟女高潮一区二| 美女18禁一区二区三区视频| 日韩精品在线观看高清视频| 蜜臀88AⅤ色欲A片无码| 国产精品一区二区在线观看| 调教小SAO货撅起屁股扒开| 色天天躁夜夜躁天干天干| 亚洲精品久久久无码大桥未久| 久久精品 91大神 一区| 国产亚洲精品aaaaa| 丝袜精品久久久久久久不卡| 欧美精品亚洲精品小说区| 精品久久久久一区二区作者| 青青操视频在线免费观看| 可以直接看的黄片一区二区| 夜夜操天天操天天操夜夜操| 亚洲国产精品v在线播放| 国产精品熟女露脸对白视频| 制服丝袜中文字幕久久久| 浴室高潮bd在线观看| 亚洲成片在线看一区二区| 爆操出白浆视频在线观看| 国产片一区二区三区四区| 香港特级三a毛片免费观看| 亚洲精品午夜级久久久久| 国产日韩v精品一区二区| 久久国产午夜精品理论片| 青娱乐久久精品| 蜜臀成人av免费在线观看| 国产精品日本一区二区在线播放| 久久久久久精品免费不卡| 亚洲性啪啪无码av天堂| 户外露出国产精品短视频| 国产亚洲欧美精品久久久久|